多糖是極性強的大分子化合物,提取時一般先將原料脫脂、脫色,然后用水、鹽或稀堿液在不同的溫度下提取,提取物濃縮后加沉淀劑(如丙酮、乙醇等)離心沉淀,沉淀通過冷凍干燥得洋H多糖。
多糖大多數采用不同溫度的水、稀堿溶液進行提取。如果用稀酸提取,應注意提取的時間要短,提取溫度不宣太高,以避免糖苷鍵的斷裂。
大部分多糖在有機溶劑中的溶解度極小,所以可用有機溶劑作為沉淀劑來沉淀多糖。常用的有機溶劑為甲醇、乙醇、異丙醇及丙酮,這些溶劑能降低多糖的溶解度而得到粗多糖。乙醇、異丙醇是認可的適合食品級多糖提取的最佳沉淀劑。在pH7.0左右,反復溶解與醇析,即可得到粗多糖。
用水或稀堿提取的多糖常含有蛋白質,需要去除,常用的去蛋白的方法有Sevage法、BECM法、三氯乙酸法、三氟三氯乙烷法、糠酸法、酶法以及酶法結合Sevage法等。前兩種多用于,后者多用于植物多糖。Sevage法是經典的除蛋白方法,復雜、費時且樣品損失較大。
粗多糖中常含有一些色素(游離色素或結合色素),根據其不同性質采取不同的方法。常用的脫色方法有、氧化法、金屬絡合物法、吸附法(纖維素、硅藻土、高嶺土、活性炭等),DEAE一纖維素是最常用的脫色方法,通過不僅達到脫色目的 而且可以進行多糖的分離。H202,是一種氧化脫色劑,濃度不宜過高,宜在低溫下進行,否則引起多糖的降解。對于同時含有游離蛋白和色素的多糖,可通過生成金屬絡合物的方法同時除去蛋白和色素,即加入費林試劑生成不溶性絡合物,經分離后用分解絡合物。吸附脫色法也常應用,如通過活性碳、高嶺土、硅藻土柱達到脫色的目的。
粗多糖是混合物,一般用柱層析法進行純化,柱層析法可分為兩類,一類是凝膠柱層析,如sephadex、sepharose、Bio gel等;一類是,這種分級不僅按電荷性質不同,同時也有分子篩的作用,如DEAE一纖維素、DEAE一sephadex、CM一sephadex、SE一sephadex等。這種常用水、緩沖液或酸堿液洗脫。檢測手段一般沿用苯酚硫酸法,也常用LKB柱層析系統,用比旋光度、示差折光及,各組分的峰位自動記錄,分離效果好且方便。此外,粗多糖的純化方法還有分級沉淀、超濾和超速離心等方法。